МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИСКУССТВЕННОМУ ОСЕМЕНЕНИЮ КОРОВ И ТЕЛОК ЧАСТЬ 1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИСКУССТВЕННОМУ ОСЕМЕНЕНИЮ КОРОВ И ТЕЛОК

2003 год

Составители: доктор биологических наук, профессор Гавриков А.М., доктор биологических наук, профессор Лебедев В.И., кандидат биологи-ческих наук, доцент Белоножкин В.П., кандидат биологических наук, доцент Тарадайник Т.Е, доктор сельскохозяйственных наук, профессор Карликов Д.В., кандидат сельскохозяйственных наук Ескин Г.В., главный специалист Турбина Г.С., доктор биологических наук, профессор Решетникова Н.М., доктор биологических наук Субботин А.Д., начальник отдела племенных ресурсов с Госплеминспекцией департамента животноводства и племенного дела Щербак Л.В.

Экономическая эффективность молочного животноводства во многом зависит от уровня организации воспроизводства маточного поголовья крупного рогатого скота. Искусственное осеменение обеспечивает ускорение темпов улучшения породных и продуктивных качеств животных за счет максимального использования выдающихся производителей, особенно проверенных по качеству потомства. В сочетании с криоконсервированием метод позволяет длительно сохранять генофонд ценных животных в спермобанках, производить обмен генетическим материалом между регионами, государствами и континентами. Искусственное осеменение животных стерильными одноразовыми инструментами профилактирует распространение заболеваний, передающихся при естественном спаривании.

Преимущества искусственного осеменения коров и телок в полной мере проявляется при проведении в хозяйствах целенаправленной селекционно-племенной работы, обеспечении животных физиологически обоснованными условиями содержания и кормления, наличии квалифицированных кадров по искусственному осеменению животных, проведении зооветеринарной работы, оснащении пунктов искусственного осеменения необходимым оборудованием, инструментарием и другими материалами.

1. Организация пункта искусственного осеменения коров и телок в хозяйстве

1.1.Необходимым условием проведения искусственного осеменения коров и телок является наличие в хозяйстве оборудованного пункта. Пункт может располагаться в специальных или переоборудованных помещениях, отвечающих зооветеринарным требованиям.

При осеменении коров и телок на пастбищах необходимо иметь летний вариант пункта с системой загонов, расколов и прогонов для животных.

Возможен вариант передвижного пункта для искусственного осеменения на автомобильном транспорте.

1.2. При строительстве или организации пункта искусственного осеменения необходимо выполнять следующие требования:

- пункт искусственного осеменения располагается в торце или другой части животноводческого помещения, удобного для этих целей. При содержании животных в двух и более скотных дворах, пункт необходимо располагать так, чтобы сократить до минимума время переноса семени из лаборатории пункта к месту осеменения;

- пункт должен иметь лабораторию площадью не менее 6 кв.м, в которой размещают оборудование, инструменты и другие материалы, необходимые для хранения, оттаивания, оценки качества и проведения искусственного осеменения;

- пункт должен иметь моечную площадью не менее 6 кв. м, совмещенную с раздевалкой. Она оснащается раковиной с подводом воды для мытья рук, инструментов и шкафом для верхней одежды, спецодежды и обуви;

- при беспривязном содержании, в непосредственной близости от пункта необходимо иметь три-пять фиксационных станка для осеменения животных.

2.1. Порядок представления заявок и выдачи разрешения на проведение искусственного осеменения сельскохозяйственных животных осуществляется в соответствии с федеральным законом "О племенном животноводстве" (гл. 7, ст.37, 38 и 41).

2.2. Право на открытие пункта искусственного осеменения в хозяйстве имеет государственная племенная служба региона на основе заключения комиссии, в состав которой входят представители федеральных племпредприятий, ветеринарной и зоотехнической службы района и хозяйства.

2.3. Комиссия по лицензированию проверяет ветеринарно-санитарное состояние фермы, квалификацию оператора по искусствен-ному осеменению, пригодность пункта для работы (состояние подъездных путей, наличие оборудования, инструментов, материалов, формы учета и др.). В хозяйстве должен быть договор с племпредприятием и график по доставке спермы и жидкого азота.

2.4. Акт комиссии о готовности пункта искусственного осеменения служит основанием для выдачи паспорта на открытие и эксплуатацию пункта (приложение 1).

2.5. Хозяйство имеет право приобретать сперму быков-произво-дителей только у государственных племпредприятий или в организациях, по искусственному осеменению имеющих лицензию Министерства сельского хозяйства РФ на производство и реализацию племенной продук-ции (спермы) и регистрацию в государственном племенном регистре.

3.1. Операторами по искусственному осеменению животных могут работать зооветспециалисты, лица имеющие высшее или среднее специальное образование, опыт работы в животноводстве, прошедшие подготовку на специальных курсах и стажировку по искусственному осеменению, получившие удостоверения государственного образца на право соответствующей деятельности.

Федеральные и другие лицензированные организации по искусствен-ному осеменению сельскохозяйственных животных ежегодно должны проводить переаттестацию операторов.

3.2. Оплату труда оператора по искусственному осеменению рекомендуется производить в зависимости от объемов проводимой работы и ее результативности с учетом конкретных производственных условий.

Рекомендуется ежемесячное авансирование с учетом прожиточного минимума и оставшийся фонд заработной платы в виде доплаты за полученную стельность.

Норма обслуживания для оператора составляет не менее 400 голов в год, с учетом обеспечения транспортом, отдаленности фермы, состояния дорог и т.д.

Работников, занятых воспроизводством стада крупного рогатого скота, премируют по показателям производства в размере, установленном в хозяйстве за сверхплановый выход телят на 100 коров, экономию спермы и другие показатели. Операторам, имеющим звание «Мастер животноводства 1 класса» и «Мастер животноводства 2 класса» выплачивают доплату к заработанной плате в размере 20 и 10%, соответственно.

3.3. Оператор по искусственному осеменению обязан: - выполнять действующие методические указания по искусственному осеменению коров и телок;

- принимать сперму и соблюдать правила ее хранения;

- проверять под микроскопом качество спермы при получении и перед осеменением;

- использовать сперму в соответствии с селекционно-племенным планом хозяйства;

- организовывать и лично участвовать в работе по выявлению коров и телок в охоте, сообщать ветеринарному специалисту хозяйства о многократно перекрывающихся и подозреваемых в заболевании животных;

- своевременно проводить осеменение коров и телок;

- вести записи в журнале искусственного осеменения: дата осеменения коровы, сроки запуска и отела, бык-производитель, результаты ректальных исследований на стельность и т.д.;

- составлять заявки на приобретение спермы, оборудования, инструментов;

- ежемесячно предоставлять главному зоотехнику или зоотехнику-селекционеру хозяйства отчет по искусственному осеменению животных;

- содержать в чистоте помещение пункта, оборудование, инструменты, спецодежду и систематически проводить их дезинфекцию; - соблюдать распорядок дня, правила безопасности и личной гигиены;

- постоянно работать над повышением своей квалификации.

3.4. Оператор по искусственному осеменению имеет право:

- организовывать проведение моциона животных и других мероприятий по профилактике бесплодия;

- контролировать соблюдение правил содержания и ухода за животными после проведения искусственного осеменения;

- давать указания работникам фермы о своевременном выявлении коров и телок в охоте;

- не использовать для осеменения сперму, не соответствующую ГОСТу;

- оказывать помощь ветеринарному врачу в исследованиях животных на стельность и при необходимости в их лечении;

- сообщать руководству хозяйства об имеющихся недостатках и нарушениях, вносить предложения по улучшению воспроизводства стада;

- участвовать в работе комиссии по выбраковке коров и телок.

4.1. Выбор оптимального времени для искусственного осеменения коров и телок необходимо проводить по комплексу физиологических признаков с учетом стадии полового цикла: течки, общего возбуждения, половой охоты и овуляции. Продолжительность полового цикла от 18 до 24 дней, в среднем 21 день.

Течка определяется по количеству и качеству выделяющейся из половых путей слизи, интенсивности набухания и покраснения слизистых оболочек преддверия влагалища и влагалищной части шейки матки, степень раскрытия ее канала. В начале течки слизь стекловидно-прозрач-ная, жидкая, в середине течки она тянется в виде нити или шнура, в конце - мутновато-белесая, вязкая, липкая. Продолжительность течки 2-3 суток.

При заболеваниях половых органов слизь может иметь примеси гноя желто-зеленого цвета или крови. Сведения об этих животных необходимо передавать ветеринарному специалисту фермы.

Общее возбуждение сопровождается беспокойным поведением животного, отказом от корма, снижением удоя. Коровы и телки прыгают на других самок, иногда допускают прыжки на себя. Общее возбуждение продолжается 15-20 часов.

Охота у самок проявляется в виде готовности к спариванию. Коровы и телки спокойно стоят и допускают прыжки на себя, тем самым проявляют «рефлекс неподвижности», принимая при этом позу, характерную для полового акта. Продолжительность охоты колеблется от 10 до 20 часов, в среднем 15-16 часов. У старых коров она более продолжительная, чем у молодых.

Проявление половой охоты у коров и телок мясных пород имеет свои особенности. У 30-40% коров продолжительность половой охоты, особенно в зимний период, составляет 7 часов и менее. Отдельные животные имеют признаки анэстрального состояния, при явной атонии матки и гипофункции яичников.

Овуляция - это разрыв созревшего фолликула и выход из него яйцеклетки. Овуляция происходит в большинстве случаев в ночное время, через 10-15 часов после окончания или через 24-30 часов от начала охоты.

4.2. Время искусственного осеменения коров и телок определяется следующими методами:

- визуально по изменениям поведенческой реакции животного, состояния наружных половых органов;

- вагинально - с помощью стерильного влагалищного зеркала осматривают влагалище и шейку матки (припухлость, качество и количество выделяемой слизи и т.д.);

- ректально - по состоянию матки и развития фолликулов. Матка должна быть ригидной, т.е. хорошо сокращающейся, на яичниках определяют наличие фолликулов. При диаметре фолликула 0,5-1 см (Ф-1) - начало охоты, при диаметре фолликула 1-1,5 см (Ф-2)-середина охоты и при диаметре фолликула 1,5-2 см и более (Ф-3) - конец охоты, то есть оптимальное время для осеменения. Это значит, что до овуляции осталось 6-12 часов.

4.3 Коров и телок выявляют в охоте не менее 3 раз в сутки: в утренние и дневные часы во время прогулок или пастьбы и вечером, до или после вечерней дойки или ухода за животными.

Осеменению подлежат здоровые телки в возрасте 15-18 мес., живой массой, соответствующей стандартам породы. Коров с нормальным состоянием половых органов осеменяют в полноценную охоту после отела, телок после 5-6 циклов с начала проявления рефлексов.

Коров и телок осеменяют двукратно с интервалом 10-12 часов, придерживаясь следующих правил:

- если животное пришло в охоту утром, то осеменение следует проводить вечером и повторять утром следующего дня;

- если охота выявлена вечером, осеменяют утром и повторяют вечером следующего дня;

- если охота проявилась в первой половине дня, то осеменение проводят вечером и повторяют утром следующего дня.

В тех случаях, когда охота, после второго осеменения продолжается, животное следует осеменять третий раз.

Оператор с высокой квалификацией и опытом работы, владеющий методом ректального исследования, может осеменять корову или телку однократно по состоянию фолликула в стадии Ф-3 (фолликул флюктуирует).

После осеменения коров и телок следует выдерживать на привязи как минимум 1-2 часа.

Через 60 дней после осеменения животных, не пришедших в охоту повторно, ректально исследуют на стельность.

Нестельных, многократно перекрывающихся или не приходящих в охоту животных следует представить ветеринарному врачу для исследования на патологию, выявления причин подобного явления и назначения соответствующего курса лечения.

5.1. Посторонним лицам входить на территорию пункта искусственного осеменения запрещается. При входе на всю ширину дверного проема и длину не менее 1,2 метра оборудуют дезковрик, увлажненный 2%-ным раствором едкого натра или другими дезосредствами, разрешенными к применению Департаментом ветеринарии МСХ Российской Федерации. Материалом для дезковрика могут служить опилки или поролон под сеткой.

5.2. Стены пункта должны быть покрыты масляной краской, глазурованной плиткой или пластиком, чтобы их легче было мыть и дезинфицировать.

5.3. Ежедневно после окончания работы проводят влажную уборку помещения. Если пункт оборудован станком для осеменения, то последний подвергают механической очистке и моют 2-3%-ным горячим (70С) раствором натрия бикарбоната. Таким же раствором один раз в неделю моют рабочий стол, полы и стены пункта.

Побелку потолка и стен проводят по мере загрязнения раствором свежегашеной извести.

Систематически проводят дезинфекцию помещения дезосредст-вами, не имеющими запаха, например, горячими (70С) растворами: 1-2%-ным едким натром, 1,5-2%-ной каустифицированной содопоташной смесью и т.п.

Для уничтожения мух используют липучки, ловушки, электро-устройства, аэрозольные препараты, специально предназначенные для применения на пунктах искусственного осеменения.

Окна в помещении должны быть занавешаны не пропускающими прямые солнечные лучи светлыми шторами, форточки в летний период закрывают мелкоячеистой сеткой.

5.4. Согласно ОСТу 10 286-2001, оператор при выполнении работ по искусственному осеменению должен иметь два хлопчатобумажных костюма, два колпака (косынки), две пары нательного белья, два фартука из армированной пленки, сапоги резиновые или ботинки. При работе с жидким азотом оператору необходимо дополнительно иметь перчатки из натуральных материалов и защитные очки.

Спецодежду следует использовать только на пункте и при работе на ферме. Костюмы (халаты), колпаки (косынки) стирают не реже одного раза в неделю. Резиновые сапоги и фартуки моют теплой водой и обеззараживают 2%-ным раствором каустической соды.

5.5. Для предупреждения распространения заразных болезней оператор обязан выполнять следующие правила:

- до и после осеменения или обследования каждой коровы тщательно мыть руки с мылом, а затем обрабатывать их ватным тампоном, смоченным 70-ным этиловым спиртом;

- работать в специально предназначенных для осеменения перчатках (на каждое животное - перчатка);

- для осеменения использовать стерильные инструменты;

- использованные перчатки, пипетки, чехлы и т.п. складировать в специально отведенный контейнер для последующей утилизации;

- мыть и дезинфицировать сапоги и фартуки после работы и перед выездом на каждую ферму;

- при переезде с фермы на ферму оператор может перевозить с собой только сосуд Дьюара со спермой в жидком азоте. Инструменты и материалы для осеменения должны быть на каждом пункте.

5.6. Стерилизовать инструменты и материалы следует одним из следующих способов: кипячение, сухой жар, фламбирование (обжигание некоптящим пламенем), автоклавирование, обработка химическими средствами, облучение ультрафиолетовыми лучами.

Кипячением стерилизуют стеклянные шприцы, металлические инструменты. Для этого тщательно промытые шприцы разбирают, цилиндр оборачивают бинтом и прикрепляют к нему поршень. Инструменты помещают в стерилизатор, заливают на 2\3 объема дистиллированной водой, закрывают крышкой, доводят до кипения и кипятят в течение 20 минут. Не снимая крышки, дают остыть. Только после этого инструменты извлекают стерильным пинцетом; в шприцы вставляют поршни, заворачивают их в стерильные салфетки и помещают в шкаф. Остатки воды с инструментов удаляют стерильными салфетками. Канал шприца освобождают от остатков воды стерильным 0,9%-ным раствором хлорида натрия, 1%-ным раствором бикарбоната натрия или 2,9%-ным раствором цитрата натрия. Влагалищные зеркала стерилизуют отдельно от посуды и инструментов.

Сухим жаром стерилизуют стеклянные инструменты, вату и марлю. Стерилизацию проводят в сушильном шкафу при температуре +160С в течение одного часа тридцати минут или при +180С в течение часа. Отсчет срока стерилизации начинают, когда температура в шкафу достигнет нужного уровня. Перед началом стерилизации следует обернуть инструменты пергаментной бумагой или фольгой. Так же поступают с ватой и марлевыми салфетками. Чистые сухие колбы, флаконы и т. п. накрывают фольгой или пергаментной бумагой, которую закрепляют нитками. Окончив стерилизацию, шкаф выключают, но открывают только после остывания до +50…+60 С .

Фламбирование применяют для стерилизации металлических инструментов, но в том случае, когда нет возможности простерилизовать их другими способами или при необходимости быстрого обеззараживания, поскольку металлические инструменты, особенно режущие, от этого портятся. Для обжигания можно пользоваться газовой плитой, примусом, спиртовкой или тампоном, смоченным 96-ным спиртом.

Автоклавирование используют для стерилизации инструментов из полимерных материалов, растворов, хлопчатобумажной спецодежды, салфеток, полотенец и т.п. Проводят стерилизацию в автоклавах, согласно прилагаемым к ним инструкциям.

Полимерные шприцы для осеменения спермой в облицованных гранулах моют и стерилизуют для повторного (до 10 раз) использования путем их погружения в 0,5%-ный раствор хлорамина Б на 24 часа или облучением с помощью бактерицидных ламп в течение 40 минут на расстоянии 20 см от источника ультрафиолетовых лучей.

Использованные предметные и покровные стекла моют в теплой воде и протирают стерильной марлевой салфеткой.

Стерильные инструменты хранят в застекленных шкафах или в настольном ящике-витрине, оборудованном бактерицидной и электри-ческой лампами. Нельзя хранить инструменты на столе под марлей: это не защищает от микробного загрязнения.

5.7. Растворы хлорида натрия, цитрата натрия и бикарбоната натрия готовят ежедневно. Для приготовления 0,9%-ного хлорида натрия берут мерный цилиндр или колбу на 100 мл, наливают туда 40-50 мл дистиллированной воды, вносят 0,9 г хлорида натрия и перемешивают до полного растворения. Затем, доливая дистиллированную воду, доводят количество раствора до 100 мл. Аналогично готовят растворы цитрата и бикарбоната натрия, используя на 100 мл раствора 2,9 г цитрата натрия и 1г бикарбоната натрия, соответственно. Полученные растворы подогре-вают до +90…+95С, либо стерилизуют автоклавированием. Хранят в стерильных флаконах.

70-ный раствор спирта готовят путем добавления к 73 мл 96-ного спирта-ректификата 27 мл дистиллированной воды. Правильность приго-товления проверяют спиртомером.

Для обработки наружных половых органов перед осеменением следует использовать раствор фурацилина, который готовят следующим образом: в 1 литре кипящей воды растворяют 10 г хлористого натрия и 0,2 г фурацилина, охлаждают и фильтруют. Хранят раствор фурацилина не более двух дней в бутылке из темного стекла или в затемненном месте.

5.8. Инструменты, предназначенные для использования на пастбище, после стерилизации оборачивают стерильными марлевыми салфетками, затем полиэтиленовой пленкой и укладывают в сумку. Еженедельно сумку моют горячим содовым раствором, прополаскивают горячей водой. При возвращении из неблагополучного хозяйства это делают немедленно в специально отведенном месте.

5.9. Дезинфекцию сосудов Дьюара с профилактической целью проводят один раз в год согласно «Инструкции по дезинфекции криобиологических сельскохозяйственных сосудов», утвержденной Глав-ным управлением ветеринарии МСХ СССР в 1983 г.

6.1. Замороженную сперму хранят в специальных сосудах, заполненных жидким азотом при -196С. Сосуды ставят на деревянные подставки.

Сосуды Дьюара состоят из кожуха и внутреннего сосуда, подвешенного на стеклопластиковой или металлической горловине. НПО "Гелиймаш" в настоящее время производит и реализует следующие сосуды Дьюара для сельского хозяйства: СДС-6, СДС-35, СДС-35М, СДС-35А.

6.2. Заправку сосудов Дьюара рекомендуется проводить после испарения азота не более 2\3 от вместимости. В случае задержки с дозаправкой необходимо опустить канистры со спермой на дно сосуда.

Для определения уровня жидкого азота в сосуде рекомендуется пользоваться деревянной мерной линейкой или деревянной палочкой, длиной, соответствующей высоте сосуда. Предварительно продезин-фицированную спиртовым тампоном линейку или палочку опускают внутрь до дна сосуда, заметив пальцем на ней верхний край горловины сосуда; извлекают через 5-6 секунд. На воздухе часть линейки или палочки, которая была погружена в жидкий азот, покрывается инеем, по высоте которого определяют уровень азота в сосуде.

Переливание жидкого азота из одного сосуда в другой допускается только с помощью переливного устройства. Наклонение сосуда при переливании азота может привести к повреждению соединения стеклопластиковой горловины внутреннего сосуда с верхней крышкой кожуха и быть причиной потери вакуума.

В случае появления на поверхности крышки кожуха сосуда инея или «снежной шубы», слой которой нарастает по мере испарения жидкого азота, сосуд надо немедленно разгрузить, жидкий азот слить, поставить сосуд на отогрев в течение 1 - 2 суток в помещении, куда запрещен доступ посторонним. Подобные сосуды подлежат списанию.

6.3 Перевозка сосуда допускается всеми видами транспорта только в вертикальном положении с соблюдением при этом мер предохранения от повреждения и опрокидывания.

В стойловый период сосуд Дьюара должен находиться на стационарном пункте искусственного осеменения в хорошо вентилируемом помещении в отдалении от отопительных приборов.

С переводом скота на летнее содержание, все необходимое оборудование, в том числе сосуд Дьюара, размещают в передвижном пункте искусственного осеменения, который должен находиться, по возможности, в более прохладном и защищенном от попадания прямых солнечных лучей месте.

Пункт искусственного осеменения должен быть укомплектован не менее чем двумя сосудами Дьюара: один для стационарного хранения спермы, емкостью 25 - 35 литров, и переносным (например, СДС-6), емкостью 5-6 литров.

6.4. Во избежание перепада температур при работе с заморо-женной спермой, на пункте не допускается использование канистр с решетчатым дном, а также канистр, которые допускают утечку жидкого азота

Не следует для расфасовки необлицованных гранул использовать полотняные и марлевые мешочки, так как данный вид расфасовки не предохраняет от возможного микробного загрязнения спермы через жидкий азот. Предпочтительны металлические тубы.

6.5. Категорически запрещается хранить медикаменты и дезинфицирующие средства, не предусмотренные на пунктах по осеменению животных. Запрещается курить в помещении, где хранится сперма.

6.6. На племпредприятиях Российской Федерации сперму, сохраняемую при - 196С, замораживают по трем технологиям: в необлицованных гранулах, в облицованных гранулах и в соломинках.

6.7. При работе с замороженной спермой необходимо выполнять следующие положения:

6.7.1. Сперму из сосуда Дьюара извлекают только после того, как станет известно, сколько животных подлежит осеменению. Ни в коем случае нельзя оттаивать сперму впрок.

6.7.2. Размораживание спермы следует проводить в водяной бане (термостате) при температуре +38… +40 С.

При резком снижении температуры оттаянной спермы ниже +18С спермии могут испытать холодовой шок и погибнуть. Во избежание этого температура на пункте искусственного осеменения должна поддерживаться не ниже +18С. При переносе из лаборатории к месту осеменения шприцы со спермой следует помещать в полиэтиленовые чехлы, перчатки, а в холодное время использовать утепленные пеналы.

6.7.3. Для оттаивания и оценки качества спермы используют специальные биологические термостаты, микроскоп с нагревательным столиком ( Морозова или Пакенаса), пинцет анатомический длиной 25 - 30 см, корнцанг или ножницы-извлекатель для соломинок, ножницы, термометр, предметные и покровные стекла, стеклянную палочку, пластмассовую подставку для инструментов, тампонницу с притертой крышкой для смоченных спиртом тампонов, 2,9%-ный раствор цитрата натрия в запаянных стеклянных ампулах по 1 мл.

6.7.4. Оператор в лаборатории надевает чистый костюм (халат), колпак (косынку), достает из шкафа тампонницу с тампонами, пропитанными спиртом, пинцетом извлекает тампон, обрабатывает кисти рук и стол. Вторым тампоном обрабатывает подставку для инструментов и ставит ее на обработанную часть стола. Третьим тампоном обрабатывает инструменты и кладет их на подставку. Четвертым тампоном протирает один из углов пакета с пипетками (чехлами), надрезает угол пакета или прорывает его концом пипетки (чехла), выдвигает ее и соединяет при помощи муфты со шприцем. Открытый угол пакета следует загнуть и закрепить скрепкой. Далее оператор снимает с микроскопа чехол, по необходимости протирает, подключает электроосветитель, нагревательный столик и термостати-рованную водяную баню, вставив в нее термометр; регулирует освещенность в микроскопе, делая ее неярко-матовой; предметные и покровные стекла кладет на обогревательный столик микроскопа; обрабатывает ампулу с цитратом натрия спиртовым тампоном, обрезает резаком и вскрывает ее. В отверстие должна свободно проходить гранула спермы. Вскрытую ампулу с цитратом помещают в термостатированную баню на подогрев. Нельзя вскрывать ампулы, разбивая их по наружной стенке, так как стекло, попавшее в цитрат, может травмировать слизистую оболочку матки.

6.7.5. Для оттаивания необлицованных гранул объемом 0,1 - 0,2 мл необходимо иметь термостат биологический марки ТБ-010 со штативом или поролоновым амортизатором внутри, 2,9%-ный цитрат натрия промышленного производства, расфасованный по 1 мл в ампулы вместимостью 3 мл, анатомический пинцет длиной 25 - 30 см. Ампулу с цитратом вскрывают и ставят в термостат на 2 - 3 минуты при температуре 38-40°С. Канистру с тубой подтягивают к горловине сосуда Дьюара и предварительно охлажденным в жидком азоте пинцетом (корнцангом) вскрывают тубу со спермой. Затем пинцетом (корнцангом) захватывают гранулу и переносят ее в ампулу с раствором цитрата, находящуюся в термостате. Время извлечения гранулы из жидкого азота до переноса ее в водяную баню не должно быть более 5 секунд. Опускают канистру в сосуд Дьюара и закрывают его крышкой. Оттаивать гранулу необходимо до полного перехода ее в жидкое состояние (10 секунд). В продолжении всего времени оттаивания ампулу со спермой необходимо круговыми движениями перемещать в воде. После оттаивания ампулу со спермой насухо вытирают стерильной салфеткой и ставят в штатив из теплоизолирующего материала (пенопласт, поролон) и определяют качество спермы. Категорически запрещается оттаивать в одной ампуле более 1 гранулы, а также оставлять оттаянную сперму в водяной бане. При заправке пипетки поршень шприца, соединенного с ней, следует отвести на 1/3, создав тем самым достаточный запас воздуха для выталкивания всей спермы из пипетки. Только после этого набирают сперму, не допуская ее попадания в шприц. Для проверки герметичности инструмент располагают вертикально: столбик семени должен остаться на месте.

6.7.6. Сперму в облицованных гранулах объемом 0,25 - 0,33 мл оттаивают без разбавления в 2,9%- ном растворе цитрата натрия. Облицованную гранулу извлекают из сосуда Дьюара пинцетом с широкими браншами, быстро помещают в водяную баню с температурой +38...+40С и оттаивают до появления тонкого стерженька льда (для этой цели желательно использовать микротер-мостаты МТ- 1,2 или термостат биологический ТБ- 010). Через 8 - 10 секунд гранулу извлекают, насухо протирают стерильной салфеткой и проверяют на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами: герметичной считается спермодоза, у которой не обнаруже-на утечка содержимого. После этого оценивают качество спермы на подвижность.

6.7.7. Оттаивание соломинок проводят в термостате при температуре +38С 1С в течение 10 секунд. Оператор снимает крышку сосуда и кладет ее рядом. Охлажденным в сосуде пинцетом, корнцангом или ножницами-извлекателем вынимает одну соломинку, встряхивает ее 2-3 секунды и только потом погружает в воду термостата для оттаивания. Встряхивание способствует испарению жидкого азота и предупреждает возможное растрескивание соломинок и выдавливание укупорочных шариков. В продолжении всего времени оттаивания соломинку следует перемещать круговыми движениями в воде. Через 10 секунд соломинку извлекают из термостата и, тщательно осушая стерильной марлевой или бумажной салфеткой, проверяют запись клички и номера быка на соломинке, затем энергично встряхивают, чтобы воздушный пузырек переместился к одному из шариков. Поршень осеменительного шприца оттягивают примерно на 90 мм и в трубку до упора вставляют соломинку так, чтобы кончик ее с воздушным пузырьком был снаружи. Конец соломинки обрезают стерильными ножницами строго перпендикулярно через воздушный пузырек на расстоянии около 7 мм от конца соломинки. Ножницы должны быть острыми и использоваться только для обрезания соломинок. Тупые ножницы деформируют соломинку, при этом может нарушаться плотность соединения ее с внутренней частью конусного конца защитного чехла. На шприц с соломинкой надевают защитный чехол, который тщательно закрепляют фиксатором. Надежность закрепления проверяют слабым надавливанием большого пальца на поршень: чехол не должен сдвигаться. При этом удаляется воздушный пузырек и появляется капелька спермы, которую можно исследовать под микроскопом.

От момента оттаивания до введения спермы животному должно проходить не более 10 минут.